久久精品成人91一区二区,亚洲精品一区二区三区人妖,国产精品亚洲综合色区韩国

蛋白質純化方法及原理（蛋白質純化的基本步驟及原則）

標簽：添加時間：2022-10-15 瀏覽次數:7662

　　全國服務熱線：【152-4428-9576】

　　蛋白純化技術是生物研究領域的一項重要技術。要研究某一個特殊蛋白質，首先就要將這個蛋白從生物體中分離純化出來。蛋白純化方法主要是利用不同蛋白質間的相似性與差異，依據蛋白間的相似性可以去除非蛋白物質，再根據蛋白質的差異性將目的蛋白分離出來。在本文中，我們將介紹2種常用的蛋白純化的方法。

　　1、自制的簡易柱子，直徑約為1cm，長度約為2cm，在柱子的下端加入蒸餾水，并關閉柱子的出口。

　　2、將瓊脂糖凝膠倒入柱子，讓填料自然沉降，依次用二到五倍的柱子體積的無菌水、8mol/L的尿素、無菌水洗柱子。

　　3、緩慢加入5ml的硫酸鎳，至柱子的顏色由白色變為藍色，待藍綠色收集液體滴下來為止。

　　4、用二到五倍體積的PBS緩沖液平衡柱子，再將粗蛋白樣品進行上樣，用梯度濃度50mmol/L、70mmol/L、150mmol/L、250mmol/L咪唑進行過柱，流速約為1ml/min。

　　5、以每個濃度用1.5ml的Eppendorf收集八管，再用二到五倍體積的無菌水洗柱子，再用二到五倍的50mmol/L的EDTA洗柱子，除去NiSO4，待至無色狀態

　　6、用多倍體積的無菌水進行洗柱子，將手機液10%的分離膠進行SDS—PAGE分析。

　　離子交換層析

　　1、將macro prep High-Q強陰離子交換填料混勻，吸取16 ml于小燒杯中，靜置待填料沉降至燒杯底部，吸取并棄去上清。

　　2、在燒杯中加入4倍體積的ddH2O，混勻，靜置，沉降后去上清。重復2次以充分洗去保存填料中的乙醇。

　　3、在空柱中加入柱體積10%的裝柱緩沖液，靜置除去可能存在于柱壁和柱底部薄膜上的氣泡。

　　4、以1:1（v/v）比例在燒杯中加入裝柱緩沖液（20 mM sodium phosphate,pH 7.0,1 M NaCl），混勻。用玻璃棒引流加入至柱中，并用裝柱緩沖液填滿剩余柱體積。靜置30 min。

　　5、待填料均沉降至柱底部后，將適配器以較小的傾斜角度插入至柱中填料頂部。

　　（1）打開柱低端開口，以最大流速10 ml/min泵入裝柱緩沖液，壓實填料。

　　（2）緩慢降低緩沖液的流速，并將裝柱緩沖液更換成結合緩沖液（20 mM sodium phosphate,pH 7.0）。

　　（3）設定蛋白純化程序，使用15倍柱體積緩沖液線性梯度洗脫目的蛋白。

　　（4）收集流出液，進行SDS-PAGE檢測。

　　（注意：所有層析所需的溶液以及蛋白樣品都需要使用0.22μm的濾膜過濾，少量的溶液或蛋白樣品需要可使用針頭濾器，大量的溶液需要使用506的溶劑過濾器進行過濾。）

全國服務熱線：【15244289576】
全國服務熱線：【15165428330】

上一篇：生態塘施工方案（污水處理中生態塘的作用）下一篇：實驗室廢水處理系統有哪些（6種常見實驗室污水處理方案）

15244289576@139.com